不同消毒剂对细菌的抑制作用

摘要：根据抑菌圈的大小，测定不同化学消毒剂对不同细菌的抑菌作用。采用滤纸片法测定消毒剂的抑菌作用，菌种为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。质量分数 0.25%新洁尔灭对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用最强；龙胆紫对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用次之，并随浓度的增加抑制作用增强；质量分数 5%苯酚、体积浓度 75%乙醇的抑制作用较弱；无水乙醇抑制作用最弱。同一浓度的龙胆紫、新洁尔灭、质量分数 5%苯酚和体积浓度 75%乙醇对金黄色葡萄球菌的抑制作用比大肠杆菌强；无水乙醇对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用无明显区别。
微生物引起的传染病严重危害人类健康和畜禽生产，如 2003 年的非典、2009 年的甲型 H1N1 都对我国造成重大的伤亡和财产损失。消毒是预防传染病的主要措施，化学消毒因具有应用范围广、杀菌效果好等特点一直被广泛应用，了解消毒剂的杀菌、抑菌作用和效果具有重要意义。消毒剂越来越多用于生活中，如生活用水的消毒、室内空气的消毒、医疗器械的消毒等，而且在控制和杜绝传染病中也有着重要作用。用滤纸条法测定消毒剂的抑菌、杀菌作用，将浸润有不同消毒剂的滤纸条贴在牛肉膏蛋白胨细菌培养基平板上，经培养后，根据抑菌圈的大小，即可判断不同消毒剂对同一种细菌的影响以及同一种消毒剂对不同细菌的影响，初步判断其抑菌、杀菌作用。

1 常用的化学消毒剂
消毒剂是指用于杀灭传播媒介上病原微生物，使其达到无害化要求的制剂，他不同于抗生素，在防病中的主要作用是将病原微生物消灭于人体之外，切断传染病的传播途径，达到控制传染病的目的。人们也常称消毒剂为“化学消毒剂”。常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂 （酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。消毒剂的种类繁多，用途和用法各不相同，杀菌能力和对细菌的伤害也有所不同，因此消毒时应根据具体情况科学地选用消毒剂。
1.1 有剂溶剂
苯酚和乙醇都属于有机溶剂，其抑菌原理为：可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢。
1.1.1 酚及其衍生物
酚类化合物是医学上普遍使用的一种消毒剂。其作用主要是损伤微生物的细胞质膜，钝化酶和使蛋白质变性。使用最早的是苯酚，有效杀菌质量分数 2％～5％，由于具有难闻的气味和对皮肤有刺激性而很少在临床上作消毒用。
酚系数被广泛用作比较化学药剂杀菌效率的标准。酚系数等于待测药剂在规定时间 （如 10 min)内杀死标准供试菌的较大稀释倍数与在相同条件下苯酚的较大稀释倍数的比值，常用的供试菌有 3 种，他们是金黄色葡萄球菌 （代表 G+细菌）、伤寒沙门氏菌 （代表 G-细菌） 和铜绿假单胞菌 （系一种抗性较强的 G-细菌）。苯酚的衍生物 （如甲酚、间苯二酚和六氯苯酚等） 具有较强的杀菌作用和较少的刺激性，他们常在医院用于痰、脓液和粪便等以及手术前的消毒。煤酚皂 （俗称来苏尔） 是乳化的甲酚溶液，其酚系数为 5，常用来消毒桌面、用具等。
1.1.2 醇类
能溶解细胞质膜中的类脂，破坏膜结构并使蛋白质变性，但对芽孢和无包膜病毒的杀菌效果较差。目前应用最为广泛的是乙醇，体积浓度 70%时灭菌力最强，效果较好。酒精浓度过高，则会在菌体表面形成一层蛋白膜，妨碍酒精分子进入细胞内，影响杀菌效果。加入质量分数 1%的稀酸或碱可加强其效力，若与其他杀菌剂混合使用可大大增强试剂的杀菌能力。
1.2 染料
龙胆紫是一种碱性染料，在低浓度下具有明显的抑菌效果并表现出一定的特异性。碱性染料的阳离子基团能与细胞蛋白质氨基酸上的羧基或核酸上的磷酸基结合阻断正常的细胞代谢过程。G+细菌一般对碱性染料敏感。染料对 G+细菌的作用浓度（一般10 mg / kg） 比对 G－细菌要低几十倍，因此，在分离和培养 G-细菌 （如根瘤菌） 时可以利用染色剂的抑菌能力差异抑制 G+细菌
1.3 表面活性剂
新洁尔灭是一种阳离子表面活性剂，属于季胺类化合物，杀菌作用较强。他是一种能降低液体分子表面张力的化学物质，能影响细胞质膜的稳定性和透性，使细胞的某些必要成分 （如 K＋） 流失,导致微生物生长停滞死亡。新洁尔灭杀菌剂的有效成分为溴代十二烷基二甲苄基胺，常用于卫生和空气消毒。

2 材料和方法
2.1 试验地点、时间
太原师院微生物实验室，试验时间2011年10月。
2.2 试验材料
2.2.1 菌种
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，太原师院微生物实验室提供。
2.2.2 试剂和溶液
质量分数 5%石炭酸、体积浓度 75%乙醇、无水乙醇、质量分数 0.25%新洁尔灭、质量分数 0.005%龙胆紫、质量分数 0.05%龙胆紫、生理盐水。
2.2.3 仪器和其他用具
培养皿、滤纸片、镊子、恒温培养箱、酒精灯、高压蒸气灭菌锅、小烧杯、移液管、三角涂棒。
2.2.4 培养基
牛肉膏蛋白胨培养基。
2.3 试验方法
2.3.1 培养基的配制营养琼脂 45 g，加入 1 000 mL蒸馏水加热煮沸
溶解。
2.3.2 高压蒸气灭菌
将上述培养基、培养皿、滤纸片、移液管、三角涂棒等以 0.1MPa、121.5℃、20min 高压蒸气灭菌。
2.3.3 配菌悬液
取培养 18 h～20 h 的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各 1 支，分别加入 2 mL 水，用接种环将菌苔轻轻刮下、振荡，制成均匀的菌悬液。
2.3.4 制含菌培养基
将已灭菌并冷却至 45 ℃～50 ℃的牛肉膏蛋白胨培养基倾入培养皿中约 12 mL～15 mL，水平放置至凝固。用移液管分别吸取 0.2 mL大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌悬液分别加入到上述平板中，用三角涂棒涂布均匀。
2.3.5 消毒剂处理
将已涂布好的平板底皿划分成 3 等份，每一等份内标明一种消毒剂的名称。用镊子将已灭菌的小圆形滤纸片 （D5 mm） 分别浸入装有消毒剂溶液的试管中浸湿 （注意取出滤纸片时保证过滤纸片所含消毒剂溶液量基本一致，并在试管内沥去多余药液。），操作将滤纸片贴在平板相应区域，平板中间贴上浸有生理盐水的滤纸片作为对照。
2.3.6 培养
将平板倒置于 37 ℃温箱中，培养 24 h。
2.3.7 观察结果
观察抑菌圈，并记录抑菌圈的直径。

3 结果与分析
3.1 化学消毒剂对不同细菌抑菌效果分析
质量分数0.25%新洁尔灭对大肠杆菌的抑制作用最强；龙胆紫次之，并随浓度的增加抑制作用增强；体积浓度75%乙醇和质量分数 5%苯酚抑制作用较弱；无水乙醇抑制作用最弱。
质量分数0.25%新洁尔灭对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强；龙胆紫次之，并随浓度的增加抑制作用增强；体积浓度 75%乙醇和质量分数 5%苯酚抑制作用较弱；无水乙醇抑制作用最弱。

来源：惠合UHT灭菌机网