金银花叶和花蕾提取物的抑菌活性研究

摘要：主要研究金银花叶和花蕾提取物的抑菌活性。采用快 声波法提取企银花叶和花蕾有放成分，琼脂 扩散法测定提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、病疾杆菌和枯草杆菌的抑菌效果，体积倍稀释法测定提 取物抑菌稀释度。试验结果表明，金银花叶和花蕾提取物对 4 种常见细菌都有抑菌作用，对所试细菌 的抑茵活性有显著性差异。金银花叶提取物对供试茵的抑菌活性大于金银花蕾的。

金银花为忍冬科多年生半常绿缠绕性木质藤本植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花，是临床常用的中药之一。金银花具有抗病原微生物、抗炎、解热、保肝、抗生育、止血、免疫调节、降血脂、兴奋中枢等作用，对多种致病菌均有一定的抑制作用，是一种广谱抗菌中药，其医疗作用十分广泛。 金银花叶的药源远比其花蕾丰富，采集容易，价格便宜，应该充分利用。本论文采用快 声波法来提取金银花叶和花蕾的有效成分，并比较研究两者的抑菌效果，为充分利用金银花资源提供一定的依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

JC303 型电热恒温培养箱，上海成顺仪器仪表有限公司;BHC-1300II AlB3 生物安全柜，苏净集团安泰公司;CQ-200B 快 声波清洗机，上海跃进医学光学器械厂;RE-52 旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂。

1.2 原料

金银花采自遵义医学院珠海校区后山，经形态学鉴定确为忍冬科植物金银花，洗净，晾干，干燥，粉碎后，储存于广口瓶中备用。

1.3 金银花叶和花蕾提取物的制备

称取 5 份金银花叶片来，每份 10.000 g，置于 5 个具塞锥形瓶中，加入 100mL体积浓度75%的乙醇进行快 声波提取 30 nùn，合并滤液，减压抽滤，浓缩至 50.0 mL，过滤除菌备用。同法制得花蕾提取液备用。

1.4 供试菌

枯草杆菌、大肠杆菌、荆疾杆菌、金黄色葡萄球菌，均由遵义医学院微生物实验室提供。

1.5 培养基的制备

培养基 1:将蛋白陈 10.0 g，牛肉膏 3.0 g，Na- C15.0 g，琼脂 20.0g，水 1000.0mL 混合，加热搅拌至琼脂完全溶解，调节 pH 至 7.4，分装，在 121°C下高压杀菌 20min。

培养基 2: 将蛋白陈 10.0 g，牛肉浸粉 3.0 g， 牛肉膏 3.0 g，NaCl 5.0 g，水 1000.0 mL 混合，加热搅拌溶解后处理同培养基 1。

1.6 供试菌悬液的制备

将大肠杆菌、金色葡萄球菌、荆疾杆菌、枯草芽抱杆菌 4 种供试菌接种在培养基 1 斜面上，37°C 培养 24 h ，然后用生理盐水洗脱配制成 1 x106 Cfu /mL 的菌悬液。

1.7 平板抑菌试验

采用平板打守L法，在培养皿中加人 1 x l06cfu/mL菌悬液 1 mL，每种细菌加人一个平皿，然后注入20 mL已熔化冷却至 45℃- 50℃的培养基 1，立即旋转混句，待琼脂凝固后，用外径 6mm 的灭菌打 孔器在培养基上打 5 个等距离的孔，再用滴管吸取熔化的培养基 1，每孔滴入一滴，作补孔用，以免底部漏液。然后吸取 50μL 金银花两种提取液分别加入各孔内，同时用水作对照试验，置 37℃培养箱培养 24h，量取抑菌圈直径。每个试验平行做 3 次，以平均值为抑菌圈直径。

1.8 抑菌稀释度的测定

分别将两种提取液按体积倍比法稀释到 1 : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32 的稀释度。在已灭菌的试管中加人培养基 2 和不同释释度的提取液，每一 稀释度接人配制好的 1 x l06cfu /mL 的菌悬液 0.1 mL，平行做了 3 次， 并设空白对照，37℃培养 24h 后观察结果，将试验组与对照组进行比较。

1.9 统计学处理

数据以(x士 8) 表示，应用 SPSS 16.0 统计软件，采用F检验、方差分析中均数两两比较进行方差分析，P<0.05 差异有显著性。

2 结果

2.1 金银花叶片和花蕾提取物的抑菌效果

金银花叶和花蕾的提取物对 4 种常见细菌均有不同程度的抑菌作用。对比抑菌圈大小可以看出，对所试 4 种细菌的抑菌活性由大到小 均为大肠杆菌〉金黄色葡萄球菌〉喇疾杆菌〉枯草杆菌。经统计学检验，对比金银花叶和花蕾对所试4 种细菌的抑菌效果 P<0.05 ，说明两者的抑菌活性差异具有显著意义。

2.2 金银花叶提取物的抑菌稀释度

金银花叶提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、荆疾杆菌的抑菌稀释度分别为 1 : 16、1 : 4、1 : 8、1 : 8。

2.3 金银花蕾提取物的抑菌稀释度

金银花蕾提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、荆疾杆菌的抑菌稀释度分别为稀释度 1 : 4、1 : 2、1 : 4、1 : 4。

来源：惠合UHT灭菌机网